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大標本成像系統雙光子顯微有哪些特點呢?

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大標本成像系統雙光子顯微有哪些特點呢?

發布日期:2021-09-24 作者: 點擊:

大標本成像系統雙光子顯微有哪些特點呢?

標本成像系統雙光子吸收率依賴于兩個入射光子在空間和時間上的重合程度。雙光子吸收截面很小,只有在具有很大光子流量的區域,熒光團才會被激發。因此所用激光器多為鈦激光器,可以達到 ps 或 fs 級的掃描速度,且具有非常高的峰值功率和較低的平均功率,從而可以減小或消除光漂白和光毒作用帶來的不利影響。

而在一個很小的范圍提供高密度光子,保證了雙光子的同時激發。雙光子激發過程如下。在激光照射下,基態熒光原子或分子同時吸收兩個光子而成激發態。如還原型煙酰胺腺嘌嶺二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide H, NADH)酶,在單光子激發時,在350 nm光的激發下產生450 nm熒光;而在雙光子激發時。

標本成像系統.jpg

可采用溫和的紅外或近紅外光,如750 nm激光下得到450 nm熒光。這既避免了紫外光對樣品的傷害和使用紫外光學元件的許多限制,又可延長對活體生物樣品的觀察時間,為研究氨基酸、蛋白質和神經遞質等提供了獨特而重要的方法。

雙光子激發的基本原理是,在高光子密度下,熒光分子可以同時吸收 2 個長波長的光子,在經過很短時間,即所謂激發態壽命后,發射出一個波長較短的光子。其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發熒光分子相同。

由于雙光子激發需要很高的光子密度,為了不損傷細胞,TPM 使用高能量鎖模脈沖激光器。大標本成像系統這種激光器發出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脈沖寬度只有 100 fs,而頻率可達80~100 MHz。

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關鍵詞:標本成像系統,大標本成像系統,標本成像

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