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標本成像分享希爾博士關于外泌體保存的常見問題的解答

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標本成像分享希爾博士關于外泌體保存的常見問題的解答

發布日期:2020-01-13 作者: 點擊:

希爾博士在接受外泌體NTA檢測的技術咨詢時,經常會被問到外泌體保存相關的問題。

譬如:

→我的外泌體已經在4度放了一周,還能做檢測嗎?

→我是1個月前提取的外泌體,一直放在-80度冰箱,還能做粒徑檢測嗎?

→我的樣本放在-80度冰箱兩個月了,還能提取外泌體做檢測嗎?

→我在沈陽,寄樣本去上海做檢測,可以用冰袋寄送嗎?

諸如此類………

目前并沒有定論來回答以上問題,

標本成像認為應該去文獻中尋找可參考的信息,

抑或——最科學的方式——自行做對照實驗去探究。

Example 1

數據來源:Influence of Storage Condition on Exosome Recovery , DOI: 10.1007/s12257-015-0781-x  

實驗目的:探究不同溫度下長時間保存對外泌體樣本的影響

實驗方法:對HEK 293的細胞培養上清提取分離外泌體,將外泌體樣本分成4組,分別保存在-70℃、-20℃、4℃和室溫下10天后,進行Western Blot檢測,選擇的marker為HSP70、CD63、CD9。

實驗結果:結果顯示,在-20℃和-70℃下保存的外泌體比較完整無損,而4℃和室溫下CD63已基本沒有表達,室溫保存條件下HSP70的表達量也有所降低。

標本成像

相較于4℃、-70℃和新鮮樣本,室溫存放的外泌體蛋白和RNA濃度的降低程度較明顯。

標本成像

本例說明,-20℃或更低溫度是比較可取的外泌體長期存儲條件。

Example 2

數據來源:Effects of storage temperature on airway exosome integrity for diagnostic and functional analyses ,DOI: 10.1080/20013078.2017.1359478

實驗目的:探究不同溫度下保存對外泌體樣本的影響

實驗方法:提取分離小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的外泌體,將外泌體樣本分為三組——新鮮提取組和分別保存在-80℃、4℃ 4天的兩組,通過DLS、TEM和zeta電位觀察外泌體的變化。

實驗結果:結果顯示,相較于新鮮提取的外泌體樣本,低溫儲存4天的樣本粒徑有一定程度的增大,電位數值降低,顆粒有團聚傾向;從TEM圖片看,-80℃保存的外泌體有多層結構產生。

另外,該實驗也通過無標記的LC-MS/MS評估了外泌體蛋白質含量,結果表明低溫儲存一定時間都會引發蛋白質泄露。所以,不論是從外泌體結構還是蛋白質含量角度出發,最好是在分離后立即進行各項實驗。

Example 3

數據來源:Handling and storage of human body fluids for analysis of extracellular vesicles, DOI: 10.3402/jev.v4.29260

實驗目的:探究單次凍融和不同時間、溫度儲存對血漿EVs的影響

實驗方法:血漿在新鮮狀態和分別在-20℃、-80℃、-196℃儲存6個月和1年后被檢測,通過RPS、NTA和FCM觀察粒徑和濃度的變化。

標本成像

標本成像

實驗結果:圖a-d的RPS和NTA結果說明不同溫度下儲存6個月和1年對樣本濃度和粒徑影響不明顯,CD235a和CD61的表達量也沒有太大差異,只有lactadherin的表達相對于新鮮樣本升高了約7倍(圖e)。綜上說明,該研究中用到的血漿樣本在不同溫度下(低溫)儲存,即便長達1年,也能保持一定的穩定性。

同篇文章對唾液和尿液樣本也做了類似研究,得到相近結果。

標本成像


白色:新鮮血漿;灰色:血漿凍存6個月;黑色:血漿凍存1年

也有研究團隊對不同儲存條件對外泌體中miRNA穩定性做評估:miRNA in Plasma Exosome is Stable under Different Storage Conditions (doi:10.3390/molecules19021568)。

從這幾個例子來看,不同時間、溫度的保存對不同的外泌體樣本影響不一;如果研究方向為外泌體形態特征、蛋白或其他功能性分析,在分離后新鮮使用為最佳。目前主流的建議是提取出外泌體后最好是新鮮使用,或低溫短期保存。

而到底低溫保存一定時間后是否對外泌體有什么影響,希爾博士認為還是因樣本而異,實在糾結的話,還是做對比實驗,用實際數據說話!

以上就是標本成像分享的希爾博士關于外泌體保存的常見問題的解答,希望對您有所幫助。


本文網址:http://www.darkwebonline.com/news/493.html

關鍵詞:標本成像

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